Canlı Hücre Görüntüleme Sistemi İçin Doğru Mikroskobu Seçerken Nelere Dikkat Edilmelidir?

Canlı hücre görüntüleme deneylerini başarıyla gerçekleştirmek için doğru yaklaşımı kullanmak kritik öneme sahiptir. Canlı hücre görüntülemeniz için uygun bir mikroskop seçerken aşağıdaki hususlar dikkate alınmalıdır: Numunenin canlılığı, görüntü edinme hızı (zamansal çözünürlük) ve üç boyutta da gerekli çözünürlük.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 etiket) ve uyarılma için en düşük ışık dozajı çok önemlidir.

Canlı hücre deneyleri için, özellikle vezikül gözlemi gibi hızlı dinamik süreçlerin incelenmesi için yüksek hızlı edinim genellikle kritiktir. Optik filtrelerin kullanılması, birden fazla bileşenin etkileşimini incelemek için kullanılan her renk için filtre setlerini değiştirirken ardışık görüntüleme gerekliliği nedeniyle hız sınırlamalarına neden olur. Görüntüleri ardışık olarak toplamak, eş zamanlı görüntü toplamaya göre daha fazla zaman gerektirir ve sonuç olarak, her rengin bir görüntüden diğerine daha uzun bir zaman aralığı olması nedeniyle edinim sırasında hızlı numune hareketleri kaçırılabilir. Üstelik iki veya daha fazla renk arasındaki doğrudan karşılaştırma esas olduğunda, sinyaller floroforların ayrı ayrı edinimi arasında bile hareket etmiş olabilir ve bu da verilerin yorumlanmasını zorlaştırır.

Zaman içinde 3 boyutlu görüntüler elde etmek için birden fazla teknoloji mevcuttur. Sistem seçimi, deneyinize ve görüntüleme sırasında daha yüksek hız mı yoksa daha az örnek aydınlatması mı istediğiniz 3B çözünürlüğü elde ederken önceliğiniz olduğuna bağlıdır. En uygun sistemi seçmek, geleneksel olarak kamera tabanlı veya konfokal canlı hücre görüntüleme sistemi arasında bir seçim yapmanızı gerektirir, ancak modern çözümler her iki modaliteyi de entegre bir şekilde sağlayabilir.